基于T3SS的沙门氏菌抑制剂筛选系统构建与多酚类化合物活性评价
茹梦珂;刘盼盼;李穗湘;杨珍;郝宝成;王胜义;胡庭俊;崔东安;Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system, T3SS)是沙门氏菌重要毒力因子，针对T3SS的特异性抑制剂是抗沙门氏菌感染的有效方法。用Red同源重组技术构建鼠伤寒沙门氏菌invA基因缺失株(SL1344ΔinvA),用无缝克隆连接构建pWSK29-sopE2-luc报告质粒，分别转化SL1344和SL1344ΔinvA获得报告菌株，以MOI=100感染复数建立鼠伤寒沙门氏菌感染HeLa细胞模型，建立T3SS抑制剂筛选系统，并筛选多酚类化合物以获得T3SS天然产物抑制剂。结果显示，成功获得SL1344ΔinvA菌株及SL1344(pWSK29-sopE2-luc)和SL1344ΔinvA(pWSK29-sopE2-luc)报告菌株，通过T3SS抑制剂筛选系统，筛选获得没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、咖啡酸、4-香豆酸和单宁酸T3SS有效抑制剂。本研究成功构建T3SS抑制剂筛选系统，为沙门氏菌抗毒力因子的药物筛选搭建平台。
化脓隐秘杆菌菌体与外毒素联用疫苗的研制及对小鼠的免疫保护效果评价
刘灿;余远迪;徐登峰;苗永强;许泽玉;闫晓阳;张素辉;为开发羊源化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes,TP)疫苗并评价其对小鼠的免疫保护效果，本研究浓缩羊源TP培养上清以富集外毒素PLO,再分别以PLO-菌体复合物或纯菌体为抗原，联合铝胶或ISA 61佐剂乳化，共制备了4组疫苗。通过腹腔注射不同浓度TP确定小鼠腹腔感染TP的LD100为9×108 CFU/只。小鼠免疫试验显示，4组小鼠血清细胞因子含量均随免疫次数递增，铝胶菌体-PLO苗组每次免疫后细胞因子水平均最高；一免后各组小鼠抗体水平均较低且无免疫保护作用；二免后仅铝胶菌体-PLO苗组抗-PLO抗体水平显著升高，免疫保护率达70%(其余组为30%～40%);三免后各组的抗-TP和抗-PLO抗体水平均显著增加，其中铝胶菌体-PLO苗组抗体水平最高，免疫保护率为90%,其余组为70%～80%;小鼠解剖结果显示铝胶菌体-PLO苗组小鼠脏器无明显病变；病理切片结果显示，铝胶菌体-PLO苗组小鼠脏器未见明显病理变化。综上所述，本研究使用羊源TP配合外毒素PLO所制备的铝胶佐剂灭活疫苗对小鼠具有显著免疫保护效果，为羊TP疫苗的研制奠定了基础。
阿司匹林丁香酚酯对BRL-3A和IEC-18细胞胆汁酸相关代谢的影响
范丽萍;陶琦;张治杰;葛闻博;杨亚军;李剑勇;为探究阿司匹林丁香酚酯(AEE)改善脂质代谢紊乱动物胆固醇代谢的作用机制，用代谢组学方法研究了AEE对BRL-3A和IEC-18细胞胆汁酸相关代谢的影响。将AEE分别与大鼠肝细胞BRL-3A及其高脂模型、大鼠回肠上皮细胞IEC-18共孵育，收集细胞样品，以UPLC-TOF/MS进行代谢组学分析，并结合Metabo Analyst 6.0进行代谢通路分析。结果在BRL-3A及其高脂模型中分别筛选出13个和7个差异代谢物，主要与糖代谢、氨基酸代谢、脂代谢和类固醇生物合成相关；在IEC-18中筛选出11个差异代谢物，与视黄醇代谢、叶酸生物合成、卟啉代谢和酪氨酸代谢相关。AEE对IEC-18视黄醇代谢的影响，提示AEE可能通过对视黄醇代谢的影响而调控胆汁酸的肠肝循环，从而改善机体胆固醇水平。
公猪精液中细菌分离鉴定及主要分离菌的耐药性分析
张光耀;胡呈才;罗忠笛;贾博;彭磊;袁安文;杨青;为了解湖南省某公猪站精液中细菌污染情况，收集50份新鲜精液进行细菌分离，获得的分离菌进行纯化、革兰氏染色及鉴定，对主要分离菌进行耐药性分析。结果显示，精液细菌污染率为78%(39/50),在32%(16/50)的精液样品中分离出两种以上细菌；共分离到61株细菌，90.16%(55/61)污染菌为革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌占9.84%(6/61);获得的分离菌属于11科18种属，主要有铜绿假单胞菌、奇异变形菌、肺炎克雷伯菌、弗氏埃希菌、弗氏柠檬酸杆菌、食奎尼酸沙雷氏菌、志贺氏菌属、霍氏肠杆菌、粪肠球菌和葡萄球菌等；检出率较高的是铜绿假单胞菌(28%,14/50)和奇异变形菌(26%,13/50)。药敏试验显示，铜绿假单胞菌对青霉素、氨苄西林和头孢氨苄等8种抗生素耐药，奇异变形菌对青霉素、庆大霉素和头孢氨苄等14种抗生素耐药；用4种精液稀释剂进行抑菌试验，其中两种稀释剂对奇异变形菌无抑制作用。
牛干扰素基因刺激因子STING的基因克隆、细胞定位与表达差异分析
吴瑞瑞;罗逸青;景伟;苏洋;李小明;房永祥;陈国华;景志忠;张艳;何小兵;翟军军;为探究牛干扰素基因刺激因子(boSTING)的分子特征、细胞定位及差异表达。用RT-PCR方法获得boSTING基因，其全长为1 137 bp,编码378个氨基酸，且N端存在5个跨膜结构域；通过遗传进化分析发现，家牛(Bos taurus)的boSTING与野牛、印度瘤牛、牦牛及杂牛的亲缘关系最近，与树袋熊、鸭嘴兽等的亲缘关系较远；通过双酶切、间接免疫荧光试验、qPCR及Western blot检测显示，成功构建了pCAGGS-HA-STING和pCAGGS-GFP-STING的重组真核表达质粒且能在细胞中正确表达；用qPCR、Western blot和激光共聚焦检测boSTING的细胞定位及其在牛结节性皮肤病病毒(LSDV)感染牛不同组织和细胞中的表达水平，结果显示，该分子定位于细胞质，且高表达于心脏和肾脏组织及牛肾传代细胞。本研究明确了boSTING的分子特性、细胞定位与差异表达模式，为探索其在机体抵抗LSDV等DNA病毒感染中的分子机制提供了一定的理论依据。
自由基与疾病研究进展
李勇;孔令青;高洪;严玉霖;随着基础医学和生命科学的不断发展,人们对自由基的研究越来越多,其中就有大量关于自由基与疾病的研究。自由基作为机体的正常代谢产物,在平衡状态下,其在抗菌、消炎和抑制肿瘤等方面具有重要作用和意义;一旦平衡被打破,如机体受到疾病或某些外源性药物和毒物的侵害,自由基便会产生强大的伤害作用,造成生物膜的脂质过氧化损伤,引起酶、氨基酸、蛋白质的氧化破坏,对内脏器官、免疫系统的形态功能产生影响,从而引起机体疾病,甚至死亡。目前,研究发现很多疾病的发生发展都与自由基有关。文章就自由基的产生、种类、与疾病的关系及清除进行了综述。
谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶研究进展
马森;谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷胱甘肽转硫酶(GST)是一对抗氧化酶。GSH-Px为含硒半胱氨酸,至少有4种同工酶,催化还原H2O2和有机氢过氧化物。GST不含硒,有多种同工酶,不能分解H2O2,但具有清除过氧化物和解毒的双重功能。二者广泛存在于组织细胞、红细胞、血浆和乳中,与细胞损伤、缺氧、中毒、衰老、多种疾病的发生有关;GSH-Px活性也与机体硒水平密切相关。文章综述了GSH-Px和GST的分类与结构、性质、作用、检测原理、动物临床方面的应用及研究进展。
活性氧自由基在动物机体内的生物学作用
李建喜;杨志强;王学智;自由基是近年来在基础医学和生命科学领域的研究热点,研究较多的以氧(O)、碳(C)和氮(N)为中心的活性基团。其中活性氧是机体内最常见自由基,也是近年来对其体内外生物学作用阐述最多的自由基种类之一。正常情况下,该类自由基在抗菌、消炎和抑制肿瘤等方面具有重要意义。但是,在疾病或某些外源性药物和毒物入侵后,机体抗氧化体系可能会发生紊乱,自由基代谢平衡因此失调,从而导致生物膜和大分子物质发生脂质过氧化损伤。文章对活性氧自由基在动物机体内的产生、性质和生物学作用,以及天然清除剂在机体内对自由基的抗氧化作用、自由基与疾病间的关系做了较全面综述。
抗生素在环境中降解的研究进展
刘伟;王慧;陈小军;杨大为;匡光伟;孙志良;抗生素进入环境后会经过吸附、迁移和降解等一系列生物转化过程从环境中逐步清除。抗生素在环境中降解主要有水解、光解和生物降解等方式。生物降解是大部分抗生素降解的主要途径,其中耐药菌株的降解作用尤为重要。水解主要受pH影响,光敏剂、土壤中的水分和氧化剂等能显著加速光解,微生物的生长条件决定生物降解的速率。抗生素在粪肥中以光解为主,土壤中主要是生物降解,而水体中三种降解方式都相当重要。研究不同介质中的抗生素降解方式、降解机理和各种影响降解的因素对探索处理抗生素污染和残留的最佳途径具有相当重要的意义。
3种半数致死浓度计算方法之比较
李翠萍;吴民耀;王宏元;通过对寇氏法、概率单位法及线性回归法等3种半数致死浓度(50%lethal concentration,LC50)计算方法的阐述,比较了其基本公式与操作方法等。结果表明不同时间的半数致死浓度均依线性回归法、寇氏法、概率单位法的顺序逐步升高,但差异性不显著(P>0.05)。在操作上,概率单位法和线性回归较寇氏法更容易掌握。
荧光定量PCR技术及其应用研究进展
郭杨;陈世界;郭万柱;李璟;荧光定量PCR是近年发展起来的一种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量PCR的核心。荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等特点,是对原有PCR技术的革新,扩大了PCR的应用范围。论文综述了FQ-PCR技术的原理、FQ-PCR实时定量检测系统及其应用。
自由基与疾病研究进展
李勇;孔令青;高洪;严玉霖;随着基础医学和生命科学的不断发展,人们对自由基的研究越来越多,其中就有大量关于自由基与疾病的研究。自由基作为机体的正常代谢产物,在平衡状态下,其在抗菌、消炎和抑制肿瘤等方面具有重要作用和意义;一旦平衡被打破,如机体受到疾病或某些外源性药物和毒物的侵害,自由基便会产生强大的伤害作用,造成生物膜的脂质过氧化损伤,引起酶、氨基酸、蛋白质的氧化破坏,对内脏器官、免疫系统的形态功能产生影响,从而引起机体疾病,甚至死亡。目前,研究发现很多疾病的发生发展都与自由基有关。文章就自由基的产生、种类、与疾病的关系及清除进行了综述。
抗生素在环境中降解的研究进展
刘伟;王慧;陈小军;杨大为;匡光伟;孙志良;抗生素进入环境后会经过吸附、迁移和降解等一系列生物转化过程从环境中逐步清除。抗生素在环境中降解主要有水解、光解和生物降解等方式。生物降解是大部分抗生素降解的主要途径,其中耐药菌株的降解作用尤为重要。水解主要受pH影响,光敏剂、土壤中的水分和氧化剂等能显著加速光解,微生物的生长条件决定生物降解的速率。抗生素在粪肥中以光解为主,土壤中主要是生物降解,而水体中三种降解方式都相当重要。研究不同介质中的抗生素降解方式、降解机理和各种影响降解的因素对探索处理抗生素污染和残留的最佳途径具有相当重要的意义。
细胞凋亡的主要检测方法研究进展
张广智;胡长敏;陈颖钰;刘颖;李帅;罗雨;王金勇;郭爱珍;陈焕春;细胞凋亡是生理性细胞死亡过程,凋亡在维持动物机体内环境平衡中扮演着极其重要的角色。细胞凋亡的准确检测是研究细胞凋亡相关机制,以及评价细胞凋亡在相应组织或疾病中影响的第一步。形态学是检测细胞凋亡的最直观的方法,至今一直作为细胞凋亡检测的金标准。DNA片段化检测主要有DNA ladder,TUNEL检测法和ELISA检测法。线粒体膜电位的下降是细胞凋亡的早期事件。凋亡相关基因的检测包括促凋亡基因的检测和抑制凋亡基因的检测。流式细胞术检测细胞凋亡是近些年发展的简单快捷的方法,即可定性又可定量。Ca2+作为细胞内重要的信号分子其浓度和细胞凋亡关系密切相关。
实时荧光定量PCR技术
蒋春燕;王泰健;王琴;范学政;荧光定量PCR技术是一种目前国内外应用较为广泛的定量PCR技术,是通过始点定量和荧光检测系统实时监测累积荧光强度而实现的,具有灵敏度高、特异性强、线性关系好、操作简单等优点,不但能够用于基因定量检测,还能准确定量疾病相关基因的表达,现已广泛应用于人类和动物疾病的快速检测、定量分析、早期诊断、基因分型等方面。它可以采用绝对定量和相对定量2种方式实现定量检测,但都有各自的优缺点,需根据具体的试验选择合适的定量方式,从而得到更准确的试验结果。提高荧光定量PCR技术的特异性和灵敏度需从多方面着手,主要指特异性探针及引物的设计,选择合适的Mg2+浓度、引物和探针浓度、循环数等。
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