2026年 05期
基于转录组分析2株单增李斯特菌的环境胁迫抗性机制
张坤中;田常青;曹青;崇倩;盖文燕;何佳兵;程明霞;王佳雨;王中龙;薛慧文;苟惠天;为探究单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)LM66-3和LM83-1的抗胁迫机制，研究以标准株ATCC 19111为对照，评估2株菌在低温(4℃)、强酸(pH 3.0)、强碱(pH 9.0)、高盐(10%NaCl)及氧化胁迫(10mmol/L H_2O2)下的生长性能，并结合转录组学分析其代谢通路。结果显示，分离株在各类胁迫条件下均表现出显著强于标准株的生存能力；转录组测序结果显示，LM66-3和LM83-1分别与标准株存在475和513个差异表达基因(DEGs)。GO分析显示DEGs在细菌鞭毛、谷氨酰胺酶复合体、肽聚糖跨膜转运蛋白活性和甘氨酸脱羧等功能类别中富集；KEGG富集显示DEGs主要参与丁酸甲酯代谢、ABC转运蛋白系统、糖酵解/糖异生途径、有机含硒化合物代谢、群体感应系统(QS)以及双组分系统(TCS)等通路。通过RT-qPCR验证的差异表达基因与转录组学结果一致。研究表明，LM66-3和LM83-1通过对相关通路的调控作用增强其抗环境胁迫的能力，结果为深入探究LM抗应激机制提供理论依据。
siRNA靶向干扰EGr＿09888对细粒棘球绦虫原头蚴体外发育的影响
潘星羽;吾力江·卡马力;班万里;刘帅;王冰洁;喀迪尔丁·艾尔肯;慕永辉;张壮志;赵莉;旨探讨细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus）EGr＿09888在原头蚴（protoscoleces,PSCs）发育过程中的影响。通过RT-qPCR筛选最佳EGr＿09888 siRNA片段，对体外培养3dPSCs进行siRNA电转染，收集1d、3d、7dPSCs，观察PSCs发育状态，运用RT-qPCR、Western blot分析PSCs EGr＿09888基因与蛋白的表达水平。结果显示，筛选出最佳siRNA片段为EGr＿09888-siRNA-3,RT-qPCR分析siRNA电转染后1d、3d、7d均对PSCs的EGr＿09888基因起到了不同程度的干扰作用（1d、3dP<0.000 1,7d P<0.001）,SDS-PAGE及Western blot检测1d、3d、7dPSCs EGr＿09888蛋白表达量均显著降低（1d、3dP<0.000 1,7dP<0.05），且EGr＿09888基因及蛋白表达下调后，PSCs趋向于向包囊方向发育。本研究利用RNAi技术靶向沉默PSCs中的EGr＿09888基因，首次揭示该基因对PSCs发育具有调控作用，为细粒棘球绦虫发育机制解析及防控策略制定奠定了理论基础。
兔抗猪PD-L1多克隆抗体的制备及初步应用
全钺涵;李宁;罗弼豪;郭抗抗;细胞程序性死亡配体1(PD-L1)通过调控T细胞功能参与免疫应答。由于猪PD-L1与人、鼠存在结构差异，且缺乏特异性抗体，本研究通过从PK-15细胞中克隆到猪PD-L1基因片段并进行序列分析，发现其与NCBI数据库中猪PD-L1基因序列完全相同，其二级结构主要为β折叠以及无规则卷曲。构建pET-28a重组载体表达其蛋白。纯化后的蛋白免疫新西兰兔，成功制备了可特异性用于Western blot的多克隆抗体。利用该抗体，研究发现PD-L1在猪PK-15细胞中过表达可促进猪瘟病毒（CSFV）复制，而干扰PD-L1则抑制病毒复制，表明PD-L1在CSFV感染中发挥重要作用。为后续研究PD-L1在病毒感染中的作用积累数据资料。
鸡传染性喉气管炎病毒荧光RAA检测方法的建立与应用
王素春;金雅文;祁倩;周凯钰太;潘俊慧;隋金钰;魏世萌;李超;王楷宬;为满足鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）快速检测需求，本研究拟基于重组酶介导等温扩增技术（RAA）建立一种可以检测ILTV的实时荧光恒温检测方法并对其进行评估。结果显示，该方法在39℃恒温条件下反应20min即可完成检测并实时显示检测结果，与其他常见禽呼吸道病原核酸无交叉反应，检测下限达到1拷贝/μL；采用该方法与农业行业标准方法同时对396份禽拭子样品进行检测，阳性符合率为100%，阴性符合率为99.74%。表明该方法耗时短、特异性好、灵敏度高，适用于ILTV临床样品的快速检测，为该病的快速筛查和监测提供了一种新方法。
新疆部分地区犊牛肺炎链球菌分离鉴定及其部分生物学特性分析
刘怡帆;孙雪;王一霖;张凌;秦天;王伟;付强;刘虹;苏战强;为调查新疆部分地区犊牛肺炎链球菌的流行情况及生物学特性，本研究无菌采集部分地区肺炎犊牛的鼻拭子，常规法进行链球菌分离鉴定，采用K-B法检测其耐药性，PCR法检测分离株的毒力基因和耐药基因；选取1株携带多重毒力的分离株进行小鼠半数致死量试验。结果显示，新疆3个地区肺炎犊牛鼻拭子共分离鉴定到10株链球菌，其中阿克苏地区分离率为8.33%(5/60)、伊犁地区3.75%(5/133)，昌吉地区25份样品并未检出。10株链球菌表现为多重耐药，主要携带tetA、floR等耐药基因；检测到5种毒力基因(nanA、LytA、pspA、psaA和clpP)，分离株XJ-AKS-S-15的LD50为2.18×106 CFU/mL，可在死亡小鼠心血中分离得到链球菌，小鼠肺脏、脾脏组织切片可见明显病理变化。提示链球菌对犊牛具有一定的潜在危害。
牛源副结核分枝杆菌MAP 0862蛋白的原核表达及抗体制备
杨文洁;谢梦圆;张勇;付婧;丁宁;白海鑫;郝彦儒;徐晓静;为制备副结核分枝杆菌（MAP）特异性蛋白MAP 0862单克隆抗体和副结核分枝杆菌多克隆抗体，构建MAP 0862表达载体pET-28a(+)-0862,IPTG诱导重组蛋白表达，经SDS-PAGE鉴定成功表达重组蛋白MAP 0862，纯化后免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术制备MAP 0862鼠源单克隆抗体，Western blot结果显示，MAP 0862鼠源单克隆抗体可与MAP 0862蛋白特异性结合，间接ELISA方法检测抗体效价为1∶12 800；甲醛灭活MAP菌株免疫新西兰白兔制备MAP兔源多克隆抗体，Western blot结果显示MAP兔源多克隆抗体可与MAP特异性结合，间接ELISA方法检测抗体效价为1∶3 200。本研究制备的MAP 0862鼠源单克隆抗体和MAP兔源多克隆抗体均有良好的反应原性和特异性，为研究MAP 0862生物学特性、建立MAP检测方法与疫苗开发提供理论基础。
基于代谢组学研究住肉孢子虫对藏羊肌肉氨基酸的影响
裴晓双;龙敏;单曲拉姆;米玛卓嘎;董海龙;夏晨阳;为识别和鉴定住肉孢子虫病潜在的生物标志物，采用高通量靶标代谢组学分析西藏地区感染不同强度住肉孢子虫（Sarcocystis）藏羊肌肉中氨基酸变化情况。结果表明，从高感染组、中感染组和无感染组的藏羊肌肉中共筛选25种差异氨基酸，其中无感染组与高感染组中有22种氨基酸下调，有3种氨基酸上调明显，与中度感染组相比19种氨基酸下调，6种氨基酸上调明显；基于不同组别间氨基酸含量差异性分析中，发现L-脯氨酸与L-谷氨酸无感染组与中感染与高感染间差异显著（P<0.05）；分组对比发现，无感染组与高感染组间谷氨酸两组之间差异极显著（P<0.01），甘氨酸差异显著（0.01
血清4型禽腺病毒Fiber蛋白抗原表位串联表达及其在抗体检测中的应用
陈悦;郭笑然;刘佳俐;田向学;张娜;李鹏飞;崔松奇;师延峰;王利丽;张莉;鄢明华;旨在探索利用大肠埃希氏菌表达系统串联表达血清4型禽腺病毒（FAdV-4）Fiber-1和Fiber-2蛋白的多个抗原表位多肽，以表达的重组蛋白作为包被抗原，建立一种敏感性高、特异性好的FAdV-4抗体ELISA检测方法。应用生物信息学和免疫信息学软件预测和筛选FAdV-4Fiber-1和Fiber-2蛋白的抗原表位各5个，人工合成以上10个抗原表位的串联多肽序列（命名为F1/2），应用大肠埃希氏菌表达系统表达并获得F1/2重组蛋白。以纯化的F1/2重组蛋白作为包被抗原，建立了一种FAdV-4抗体间接ELISA检测方法。性能测定结果显示建立的ELISA方法可特异性检出FAdV-4抗体，与NDV、ARV等8种病原的阳性血清无交叉反应；对FAdV-4阳性血清的检测下限为1∶12 800倍稀释；批内和批间重复性检测结果变异系数均低于5%。该方法在FAdV-4感染SPF鸡以后3d即可从血清中检出抗体；对25个鸡场的509份临床血清样品的检测结果表明，送检鸡场的场阳性率为96%，样品总阳性率为88.61%。本研究成功建立了FAdV-4抗体的间接ELISA检测方法，该方法可为FAdV-4的早期诊断和抗体监测提供工具与支持。
食品动物粪便及肛拭子奇异变形杆菌的分离及特性分析
彭鑫;国德洋;常昭宇;郭抗抗;姜艳芬;为了解食品动物养殖环节中携带奇异变形杆菌的情况，比较各动物源菌株耐药及毒力的不同。从陕西、宁夏等地养殖场采集猪、牛、羊、鸡的粪便及肛拭子306份，进行奇异变形杆菌分离鉴定、药物敏感性、耐药及毒力基因、生物膜形成能力检测及小鼠致病性试验。结果显示，分离奇异变形杆菌52株，分离率16.99%，其中鸡源菌株分离率最高42.86%；在10种抗菌药物中，分离菌对林可霉素和强力霉素耐药；对19种耐药基因检测表明，分离菌共携带12种耐药基因；对7种奇异变形杆菌毒力基因检测表明，zapA、atfA、pmfA和ptA携带率均为100%,ucaA携带率最低63.46%；分离菌中88.46%为强生物膜形成菌；腹腔注射0.2mL浓度为108 CFU/mL的奇异变形杆菌菌液可致小鼠死亡，解剖可见肝、肾、脾肿大淤血。以上研究发现鸡源菌株的耐药和毒力均很强，提示需要加强对鸡感染奇异变形杆菌的防控，以防该菌通过鸡源产品对食品安全造成威胁。
基于AlphaFold2分析猪流感病毒H3N2核衣壳蛋白及其纳米抗体的三维结构和相互作用位点
孟媛;周照斌;杜涛峰;猪流感病毒是一种严重危害养猪业的病原体。同时猪流感病毒也可以感染人，对全球公共卫生造成重大威胁。目前，已批准的抗流感病毒的药物靶点主要是神经氨酸酶和基质蛋白2，由于流感病毒的变异性及耐药性的问题，现有药物抗流感病毒效果有限。流感病毒核衣壳蛋白在不同毒株之间高度保守，是一种理想的药物靶蛋白。纳米抗体是目前已知最小的具有完整抗原结合功能的抗体片段，由于其诸多优点，已成为许多疾病新治疗药物研发的候选药物。药物与靶蛋白相互作用位点的鉴定是药物研发所必需的。AlphaFold2在预测蛋白质三维结构方面具有较高的准确性，使得药物与靶蛋白相互作用位点的鉴定更加容易。本研究利用AlphaFold2预测猪流感病毒H3N2核衣壳蛋白及其6株特异性纳米抗体的单体三维结构，并预测两者复合物的三维结构。结果显示，单体三维结构的置信度均较高或很高，复合物三维结构中，有1株纳米抗体与核衣壳蛋白复合物的三维结构是高置信度，其余是低置信度，初步确定了1株纳米抗体与猪流感病毒H3N2核衣壳蛋白的相互作用位点。结果可以为抗流感病毒纳米抗体治疗药物的研发提供参考。